最近在做外泌体相关实验帮助解答！！做透射电镜的注意事项有哪些？

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最近在做外泌体相关实验帮助解答！！做透射电镜的注意事项有哪些？

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引自免费微信小程序：皆我百晓生

进行外泌体透射电镜(Transmission Electron Microscopy, TEM)分析时，确实有许多关键步骤和注意事项需要遵守，以确保获得高质量的图像和可靠的数据。下面是一份详细的指南，涵盖了从样品制备到数据采集的整个流程：

1. 样品制备

• 纯化：使用超离心法、尺寸排阻色谱法或其他方法纯化外泌体，去除杂质。
• 固定：使用2.5%戊二醛在4°C下固定过夜，以保持外泌体结构的稳定性。
• 洗涤：使用PBS缓冲液彻底洗涤样品，去除残留的固定剂和其他可能影响成像的物质。

2. 样品加载

• 网格选择：使用铜网或碳膜网格，确保网格清洁无污染。
• 吸附：将外泌体溶液滴在网格上，静置一段时间让外泌体吸附在网格上。
• 负染色：使用磷钨酸或醋酸铀等染色剂对样品进行负染色，增强对比度。

3. 透射电镜操作

• 预调节：确保TEM设备处于最佳状态，包括真空系统、电子枪、放大倍数和焦距的校准。
• 数据采集：调整合适的电子束强度和曝光时间，以获得清晰的图像。使用自动或手动方式捕获图像。

4. 数据处理与分析

• 图像分析软件：使用ImageJ、FIJI或专用的TEM图像分析软件对采集到的图像进行分析，测量外泌体大小分布，观察形态特征。
• 数据记录：详细记录所有实验条件和结果，便于后续分析和复现实验。

注意事项

• 防止污染：在整个实验过程中，严格控制无菌环境，避免外源性颗粒物的污染。
• 样品稳定性：确保样品在制备和观察过程中的稳定性，避免因干燥或过度电子照射导致的结构改变。
• 安全操作：遵守实验室安全规定，特别是在处理有害化学物质和高能电子束时。

通过遵循上述指导原则，可以显著提高外泌体TEM分析的质量和可靠性。如果在实验过程中遇到具体的技术难题，可能需要查阅更专业的文献或向经验丰富的同行寻求建议。希望这些建议能够帮助你顺利完成实验，取得满意的结果。